实时荧光定量PCR

实时荧光定量PCR

实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。SYBRGreenⅠ法:

在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

流程

1. 根据目的基因设计合成引物或TaqMan探针

2. 提取待测样本总RNA并进行逆转录

3. 根据选择方法进行荧光定量PCR 检测（含三重复）

4. 数据分析与处理，并整理完整实验报告