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石蜡切片免疫组化实验

免疫组化

是应用免疫学基本原理--抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使(、酶、金属离子、)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为(immunohistochemistry)(immunocytochemistry)

流程

1.  石蜡切片置于67℃烘箱中,烘片2小时,脱蜡至水,用pH7.4PBS冲洗三次,每次3分钟(3×3’)。

2.  取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液,加入微波盒中,微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档微波处理10分钟,取出微波盒流水自然泠却,从缓冲液中取出玻片,先用蒸馏水冲洗两次,之后用PBS冲洗2×3’。(注:不是所有的抗体都需要微波修复的,视具体情况而定)

3.  每张切片加13%H2O2,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3×3’。

4.  除去PBS液,每张切片加1滴相应的第一抗体(相应稀释倍数),室温下孵育2小时。

5.  PBS冲洗3×5’。除去PBS液,每张切片加1滴聚合物增强剂,室温下孵育20分钟。PBS冲洗3×3’。

6.  除去PBS液,每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物,室温下孵育30分钟。PBS冲洗3×5’。

7.  除去PBS液,每张切片加1滴新鲜配制的DAB液(二氨基联苯胺),显微镜下观察5分钟。

8.  苏木素复染,0.1%HCl分化,自来水冲洗,蓝化,切片经梯度酒精脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封固,晾干后观察。

客户提供

1. 切片样本:石蜡切片、冷冻切片、细胞爬片

2. 运输:冷冻切片需干冰运输,其他常温运输

备注:活检或手术切除标本应尽快取材或固定,避免组织自溶及抗原变性等影响免疫组化结果。

结果交付

1. 原始实验结果图片(格式jpg/bmp/tif

2. 免疫组化的详细制作过程报告(含试剂和使用设备)


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