24小时客服热线
18012458830
公告动态 News
联系我们  Contact

联系地址:江苏省 无锡市 惠山经济开发区惠山大道1699号30208室

手 机:0173 1489 1243

QQ:3024333140

邮 件:lsbiotech@163.com

网 站:http://isaunl.com



全站搜索  Search

稳转细胞株的构建方法

稳转细胞株构建

稳定转染就是转染的质粒DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代,从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。

筛选稳定细胞系有两种方法:
1)转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系;
2
)慢病毒感染筛选稳定细胞系。慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。
应用:观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能(稳定,可长期进行研究)

应用范围:

1)基因过表达服务

2shRNA 干扰服务

3miRNA过表达

4)任意非编码基因的过表达

一般流程:

1.细胞培养

细胞培养是真核蛋白蛋白实验中的第一步,原核利用大肠杆菌,真核蛋白表达是培养哺乳动物细胞,常用的真核蛋白表达细胞有CHO,HEK293细胞,稳定细胞系建立选择CHO细胞。

2.稳定细胞系构建(一)

Lipofectamine转染试剂为例进行先瞬时转染,不同转染试剂参考说明书

1)将复苏后常规培养的细胞按照1-3x10^5接种到6孔板中,加入2-4ml的完全培养基,混匀放置在二氧化碳培养箱中37过夜

2)无菌状态下配置如下溶液:a 100ul的无血清培养基稀释2ug的待转染的质粒

b 100ul的无血清培养基稀释25ulLipofectamine转染试剂(血清的存在会影响转染效率,因此要使用无血清培养基转染)

3)将ab溶液混合并摇匀,室温下放置30min左右


上一页
1
彩票大赢家官网     关于我们    产品中心    资料下载    联系我们
彩票大赢家_安全购彩 彩票大赢家|官方唯一指定! 测试站点(仅供学习,请勿正式使用) 奔驰彩票网官网---彩票大赢家官网_欢迎您 奔驰彩票网官网_官网 奔驰彩票网官网-彩票大赢家官网 奔驰彩票网官网_安全购彩 奔驰彩票网官网|官方唯一指定!